Written by inmunofluorescencia se define como una técnica que permite la visualización de antígenos en tejidos o suspensiones celulares, mediante el uso de anticuerpos específicos, marcados con fluorocromo, capaces de absorber luz ultravioleta (UV), emitiéndola a una determinada longitud de onda, permitiendo su observación bajo un microscopio de fluorescencia (con luz ultravioleta).
Entre los fluorocromos más utilizados se encuentran:
- Fluresceína (FITC);
- Rodamina (TRICT).
Después de que los fluoróforos son excitados por una cierta longitud de onda, emiten fotones de luz fluorescente a una longitud de onda más larga.
Hay dos tipos distintos de inmunofluorescencia. Son ellas:
- Inmunofluorescencia directa;
- Inmunofluorescencia indirecta;
Inmunofluorescencia directa
Esta técnica, también conocida como técnica de capa única, se utiliza para detectar antígenos en muestras clínicas utilizando anticuerpos marcados con fluorocromos.
Los pasos de este procedimiento incluyen:
- Fijación del frotis de portaobjetos;
- Tratamiento con anticuerpos marcados;
- Incubación;
- Lavar para eliminar el exceso de anticuerpos marcados no unidos;
- Visualización bajo microscopio fluorescente.
Las indicaciones de esta técnica son: detección de virus, parásitos, antígenos tumorales a partir de muestras de pacientes o monocapas celulares. También se utiliza para identificar la distribución de un antígeno dentro de un tejido o compartimento de una célula.
Inmunofluorescencia indirecta
Este tipo de inmunofluorescencia, también conocida como técnica de doble capa, se utiliza para detectar anticuerpos en el suero del paciente a través de antígenos fijados en un portaobjetos, al que se aplica primero un anticuerpo específico no fluorescente. Finalmente, se coloca un anticuerpo fluorescente con marcada especificidad contra ciertos antígenos del primer anticuerpo utilizado para reaccionar con el antígeno.
Esta técnica tiene la ventaja de permitir una fluorescencia más evidente, ya que los anticuerpos fluorescentes solo se asocian con anticuerpos primarios, además de permitir trabajar con varios anticuerpos primarios específicos para diferentes tipos de antígenos, pudiendo identificar a qué clase pertenece el anticuerpo.
Por lo general, la inmunofluorescencia indirecta se usa para detectar autoanticuerpos y también para detectar anticuerpos antinucleares que se encuentran en el suero de pacientes con lupus eritematoso sistémico.
Fuentes:
http://pt.wikipedia.org/wiki/Immunofluoresc%C3%AAncia
http://www.portaleducacao.com.br/farmacia/artigos/6971/immunofluorescencia
http://www.microrao.com/micronotes/immunofluorescence.pdf
