Written by O Mancha sureña es una técnica de biología molecular que se utiliza para comprobar si una secuencia de ADN en particular está presente en una muestra de ADN analizada. Esto se logra mediante una mejora de la electroforesis en gel de agarosa. La técnica lleva el nombre de su creador, el biólogo británico Edwin Southern, lo que llevó al bautismo de otros métodos. mancha con juegos de palabras al nombre de Southern (significa «do sul», en portugués), como es el caso de mancha occidental («permanecemos Mancha del norte («norte»).
El procedimiento sigue estos pasos:
- Desnaturalización: el gel en el que se realizó la electroforesis de ADN se trata con una solución alcalina (generalmente compuesta de hidróxido de sodio) para desnaturalizar la doble hebra de ADN, dividiéndolas en hebras simples. La desnaturalización es esencial ya que el ADN en los siguientes pasos impregnará la membrana y se emparejará con la sonda.
- Transferencia de ADN a una membrana: Se coloca una membrana compuesta de nitrocelulosa o nailon sobre el gel. Se aplica una presión uniformemente distribuida al gel, lo que da como resultado el paso del ADN presente en el gel a la membrana, donde se adhiere. Luego, esta membrana se calienta (cuando está hecha de nitrocelulosa) o se expone a radiación ultravioleta (en el caso del nailon) para unir permanentemente el ADN a la membrana.
- Tratamiento de sonda: en esta etapa, la membrana es tratada con una sonda de hidroidización, que es una molécula de ADN aislada de secuencia conocida e idéntica, o complementaria, a aquella secuencia cuya presencia se quiere determinar o no en la muestra. La sonda de ADN está marcada de manera que permita su detección, y generalmente se lleva a cabo incorporando átomos radiactivos o uniéndoles colorantes fluorescentes o cromogénicos. En determinadas situaciones, la sonda hibridada se puede preparar con ARN en lugar de ADN. Esta sonda se emparejará con cualquier secuencia de ADN que sea complementaria a ella. Por lo tanto, si la secuencia buscada no está presente en la muestra en cuestión, el emparejamiento no se producirá. Por lo tanto, todo el exceso de sonda se lava de la membrana, eliminando toda la sonda no hibridada presente en ella, esté o no la sonda presente y evidenciada por una autorradiografía en una película de rayos X, o por la aparición de un cierto color si se utilizó marcaje cromogénico.
Fuentes:
http://pt.wikipedia.org/wiki/Southern_blot
http://biomedicinapadrao.blogspot.com/2010/06/southern-blot.html
http://pt.scribd.com/doc/33418362/Southern-Blot
http://www.fcfar.unesp.br/laboratorio_sandro_valentini/pdf/A40-%20SOUTHERN%20BLOT.pdf
http://www.engenhariageneticabioq.page.tl/Hibrida%E7%E3o.htm
