Written by LOS Reacción en cadena de la polimerasa (que en inglés es Reacción en cadena de la polimerasa – PCR) se define como una técnica de amplificación de ácido desoxirribonucleico (ADN) sin utilizar organismos vivos.
Este proceso fue descrito por primera vez por Kary Mullis, en 1983, y solo diez años después recibió el Premio Nobel de Química por su trabajo. En 1989, Hoffman La Roche & Perkin-Elmer Corporation patentó esta técnica.
Atualmente, o PCR é utilizado em laboratórios de investigação médica e biológica objetivando diferentes tarefas, como a identificação de doenças hereditárias, a construção de árvores filogenéticas, a clonagem de genes, teste de paternidade, detecção de organismos causadores de infecções, concepção de organismos transgênicos , entre otras.
Para realizar este procedimiento, el primer paso es extraer cuidadosamente el material genético de la célula o sitio a estudiar para que no se dañe ni se contamine. Por lo general, el material recolectado es ADN; sin embargo, el ARN se puede utilizar en una RT-PCR que consiste en un desdoblamiento de la PCR y tiene otras aplicaciones.
Una vez extraído el material, se le añade una mezcla, también denominada premezcla, en la que están presentes los dNTP (desoxirribonucleótido trifosfato), estando estas bases nitrogenadas unidas con un tres fosfato, el denominado imprimaciones (también conocidos como oligonucleótidos o cebadores) y la enzima ADN polimerasa en una solución tampón. Este material pasa a un dispositivo conocido como termociclador, calentando y enfriando el material contenido en el mismo en ciclos de temperatura preestablecidos.
Primero, el tubo se calienta a una temperatura entre 90 ° y 96 ° C para que se produzca la desnaturalización del ADN (separación de la hebra). Por lo tanto, la temperatura del termociclador desciende (50 ° a 60 ° C) para que tenga lugar la hibridación o el recocido. En este punto del procedimiento, el imprimaciones se unen con especificidad a sus secuencias de ADN complementarias. Posteriormente, hay un aumento de temperatura a aproximadamente 72 ° C para que ocurra la síntesis de polimerasa (extensión de una nueva molécula). Luego, se inicia un nuevo ciclo, normalmente se realizan de 25 a 40 ciclos para cada reacción, con una tasa de replicación exponencial.
El análisis del resultado se realiza mediante electroforesis en gel de agarosa o poliacrilamida, siendo interpretado por un profesional capacitado.
Ciertos problemas técnicos pueden interferir con el resultado de la PCR, como la contaminación del material por sustancias que se sabe que inhiben la reacción, como la hemoglobina, así como la contaminación por material genético que no se está estudiando. Así, para reducir las posibilidades de error, los profesionales que manipulan las muestras deben adoptar determinadas medidas, como el uso de guantes, tubos desechables, entre otras.
Fuentes:
http://pt.wikipedia.org/wiki/Rea%C3%A7%C3%A3o_em_chain_da_polymerase
http://educacao.genesisdbm.com.br/educacao_pcr.shtml
